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本产品是一种新型的阳离子脂质体转染试剂，可替代Lipo2000，且与Lipo2000比其毒性更低，转染效率更高。本产品适合于将核酸(DNA和RNA)转染入真核细胞，具有低细胞毒性；对多种类型的细胞和培养板都具有高转染效率；转染时血清的存在不影响转染效率的优点。

贴壁细胞和悬浮细胞(哺乳动物细胞系)的转染。

• 本脂质体基因转染试剂转染效率高，可替代Lipo2000，重复性好，操作简单。
  
• 无明显细胞毒性，抗血清干扰，用本产品转染细胞后，对于大多数细胞，72小时内不更换培养液无明显细胞毒性。使用本产品血清的存在不影响转染效率，这样可以减少去除血清对细胞的损伤。
  
• 本脂质体基因转染试剂适用范围广，适用于核酸(DNA和RNA)在多种类型细胞和培养器皿上的转染。

组分	规格
脂质体转染试剂	1.5mL
说明书	1份

保存：2～4℃，切勿冷冻，有效期1年。

• 质粒DNA转染的优化：为达到最高的转染效率和降低细胞毒性的影响，可以对DNA和转染试剂的比例以及细胞密度进行优化，一般在1：0.5~1：5的范围内优化DNA (μg)和Lip2000 (μl)的比例。
  
• 通常DNA-转染试剂复合物和细胞一起孵育6小时已经足够产生较高的转染效率。大多数细胞在本产品转染后长达72小时未见明显细胞毒性。但转染后6小时更换新鲜培养基对于一些生长非常迅速的细胞有助于提高转染效率；对于一些易于转染的细胞如HEK293T细胞，换液可视细胞生长状况而定，无需为提高转染效率而换液。
  
• 使用高纯度的DNA(A260/280比值越接近1.8越好)有助于获得较高的转染效率。
  
• 转染前细胞需处于良好的生长状态。
  
• 本产品在不同细胞上的转染效率不同，转染试剂的添加量需要摸索，具体请参考附表2和附表3。
  
• 本产品为无菌包装，无需过滤，请注意无菌取用。
  
• 为了您的安全和健康，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。

质粒DNA的转染
以下步骤以24孔板为例，对于其它培养板或培养器皿，各种试剂的用量可以参考附表1进行换算。
对大多数细胞来说，DNA(μg)与转染试剂(μl)的比例为1：2~1：3。转染时高的细胞密度可以得到高的转染效率和表达水平，并能减少细胞毒性。

• 接种细胞
  贴壁细胞：转染前一天，用500μL不含抗生素的培养基接种0.5～2×10⁵细胞，使之第二天汇合度能达到70～90%。
  悬浮细胞：在准备DNA-转染试剂复合物之前，用500μL不含抗生素的培养基接种4～8×10⁵细胞即可。
  
• 对每个转染样品，进行以下操作
  
  • 在1.5mL无菌离心管中分别加入50μL Opti-MEM I ReLipced Serum Medium和0.8μg DNA轻柔混匀，制成DNA稀释液。
    
  • 在另一个1.5mL无菌离心管中分别加入50μL Opti-MEMI ReLipced Serum Medium和2.0μL转染试剂(注意用前先混匀)，轻柔混匀，制成转染试剂稀释液，室温静置5分钟。
    
  • 将DNA稀释液和转染试剂稀释液混合，轻柔混匀，室温静置20分钟，形成DNA-转染试剂复合物。DNA-转染试剂复合物在室温下可稳定保存6小时。
• 将DNA-转染试剂复合物加入到接种好的细胞中，将培养板轻轻地前后摇动，使复合物分散均匀。
  
• 在37℃,CO2培养箱中培养4～6小时后更换培养基，继续培养。
  
• 转染后续处理：
  
  • 对于基因表达，再培养18～48小时后即可检测转染效果，如转染带GFP或者其他荧光基因的表达载体，可用荧光显微镜观测细胞转染效率。
    
  • 如果要筛选稳定细胞株，则在转染24小时后将细胞按照1:10或更高的比例接种到新鲜培养基中，第二天加入选择性培养基进行筛选。

为了更明显看出转染效率的差异，选择DNA:转染试剂相对较少的极限情况，分别用biorab脂质体基因转染试剂与进口T公司Lipo2000在293(常用的转染细胞)和786-0(细胞状态相对较差)两种细胞上转染pLJM1-EGFP质粒，24h或48h后用荧光显微镜观察绿色荧光表达情况，判断转染效率。

结论：

• 本产品在这两种细胞上，表达绿色荧光蛋白的细胞比例均比进口T公司Lipo2000高，说明其转染效率稍好于进口T公司Lipo2000。
  
• 转染后6小时不换液(即不去除转染试剂)与换液(即去除转染试剂)相比，表达荧光蛋白细胞的数量并没有减少，转染效率并没有降低，且不换液时与进口T公司Lipo2000相比，本产品蛋白表达量更高，说明其细胞毒性更低。
  
• 在细胞状态不好和DNA含量较低的极限情况下，本产品仍能使细胞表达一定量的荧光蛋白，说明其抗干扰能力和稳定性强。

附表1．不同细胞培养板中转染时培养基、核酸及转染试剂用量

细胞培养板	生长面积	培养基用量		DNA转染		siRNA转染
		铺板培养基用量	稀释培养基用量	DNA量	转染试剂量	siRNA量	转染试剂量
96-well	0.3cm2	100μL	2×25μL	0.2μg	0.5μL	5pmol	0.25μL
24-well	2cm2	500μL	2×50μL	0.8μg	2.0μL	20pmol	1.0μL
12-well	4.5cm2	1mL	2×100μL	1.6μg	4.0μL	40pmol	2.0μL
6-well	9.6cm2	2mL	2×250μL	4.0μg	10μL	100pmol	5μL
6-cm	21cm2	5mL	2×0.5mL	8.0μg	20μL	200pmol	10μL
10-cm	55cm2	15mL	2×1.5mL	24μg	60μL	600pmol	30μL

附表2．常见细胞的转染效率(仅供参考，实验条件不同转染效率会有差别)
常见细胞的转染效率(仅供参考，实验条件不同转染效率会有差别)

细胞种类

293

HCT116

WRL-68

HepG2

NIH/3T3

THP-1

Hela

MCF7

293T

TS cell

HO1980

A549

转染效率

＞80%

＞80%

~80%

~80%

~80%

＞50%

＞80%

＞80%

＞80%

＞60%

＞60%

＞80%

细胞种类

MEF

CHO-K1

Hep3B

C2C12

Neuro2a

HUVEC

MDCK

Hep2C

WEHI

B50

Calu1

L929

转染效率

＞50%

＞50%

＞80%

＞80%

＞70%

＞80%

＞80%

＞80%

＞80%

＞70%

＞70%

＞70%

附表3．用于不同细胞转染时用量参考(以96孔板为例)

细胞型号	培养基	每孔细胞数	DNA的量	转染试剂量
293H	DMEM	3×104	0.2μg	0.5μL
293FT	DMEM	3×104	0.2μg	0.5μL
293E	DMEM	3×104	0.2μg	0.5μL
293F	DMEM	3×104	0.2μg	0.5μL
COS7	DMEM	1.5×104	0.4μg	0.5μL
hela	DMEM	2×104	0.3μg	0.5μL
Caco2	MEM	3.5×104	0.3μg	0.75μL
BHK21	MEM	2×104	0.2μg	0.5μL
CHO-DG44	DMEM+HT+pro	2×104	0.5μg	0.5μL
RAW264.7	DMEM	3×104	0.2μg	0.5μL
MCF7	MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin sodium pyruvate	2×104	0.1μg	0.25μL
SW480	IMDM	3×104	0.4μg	0.5μL
MDCK	DMEM	4×104	0.6μg	1μL
CHO-K1	IMDM+Pro	3×104	0.2μg	0.5μL
HepG2	DMEM	3×104	0.5μg	0.75μL
A549	DMEM	2×104	0.3μg	0.5μL
NIH/3T3	DMEM	1.5×104	0.1μg	0.75μL
Vero	DMEM	3×104	0.3μg	0.75μL
sf9	SIM SF	5×104	0.4μg	0.75μL

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